รายละเอียดโครงการวิจัย รหัสโครงการ : MRG5280227 ชื่อโครงการ : ศึกษาการติดเชื้อแกรสเซอรี่ในหนอนไหมพันธุ์ไทยพื้นเมืองภายใต้สภาวะปลอดเชื้อโดยวิธีพีซีอาร์   Investigation of nuclear polyhedrosis virus infection in Thai silkworm, Bombyx mori under aseptic rearing by PCR method หัวหน้าโครงการ : สิริภัค สุระพร ทีมวิจัย : สิริภัค สุระพร หัวหน้าโครงการ ไมตรี สุทธจิตต์ นักวิจัยที่ปรึกษา วันที่เริ่มโครงการ : 16 มี.ค. 2552 วัตถุประสงค์ : 1 การวิจัยนี้ มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาการติดเชื้อสาเหตุโรคแกรสเซอรี่ และลักษณะการถ่ายทอดโรค โดยทำการเลี้ยงไหมด้วยอาหารเทียมด้วยเทคนิคปลอดเชื้อ (aseptic technique) กล่าวคือเลี้ยงไหมด้วยอาหารเทียมสูตรที่พัฒนาสำหรับเลี้ยงไหมไทย (โดยสูตรอาหารเทียมดังกล่าวได้วิจัยและพัฒนาโดยอาจารย์คณะวิทยาศาตร์และนักวิจัยศูนย์ นวัตกรรมไหม มหาวิทยาลัยมหาสารคาม ซึ่งอยู่ในระหว่างการดำเนินการขอจดสิทธิบัตร)ภายใต้ห้องเลี้ยงไหมแบบปลอดเชื้อ (ซึ่งมีที่ศูนย์นวัตกรรมไหม มหาวิทยาลัยมหาสารคาม) โดยไข่ไหมที่ฟักออกมาจะทำการฆ่าเชื้อที่ปนเปื้อนภายนอกเปลือกไข่ แล้วทำการเลี้ยงไหมด้วยอาหารเทียมในห้องปลดเชื้อตลอดวงชีวิตของไหม การทดลองนี้จะสามารถควบคุมการติดเชื้อที่มาจากการปนเปื้อนภายนอกได้ เพราะสามารถควบคุมอาหาร และป้องกันการปนเปื้อนของเชื้อจากภายนอก ด้วยการเลี้ยงไหมในห้องปลอดเชื้อ ตรวจเชื้อ BmNPV ในหนอนไหม โดยวิธีพีซีอาร์ งานวิจัยในขั้นตอนนี้จะได้หนอนไหมกลุ่มที่ปราศจากเชื้อ BmNPV (healthy silkworm) (การศึกษาที่ผ่านมา ถึงแม้จะมีการฆ่าเชื้อที่ปนเปื้อนมาในหนอนไหม แต่ยังเป็นการเลี้ยงแบบดั้งเดิมคือ การเลี้ยงด้วยใบหม่อน และในห้องปฏิบัติการแบบเปิด ซึ่งยังไม่สามารถควบคุมการปนเปื้อน BmNPV จากภายนอกได้) ได้มีการทดลองสุ่มเก็บใบหม่อนจากแปลงเกษตรกร พบการปนเปื้อนของเชื้อ BmNPV เมื่อตรวจด้วยเทคนิคดีเอ็นเอโพรบ (DNA probe);( อ้างอิงข้อมูลและการทดลองของผู้วิจัยเอง ไม่มีเอกสารตีพิมพ์) 2 ศึกษาลักษณะการถ่ายทอดโรคแกรสเซอรี่ในหนอนไหม จากการเลี้ยงไหมด้วยเทคนิคปลอดเชื้อตามข้อ1 เมื่อได้หนอนไหมที่ปราศจากเชื้อ BmNPV แล้ว จึงทำการให้เชื้อ BmNPV (BmNPV infection) แล้วตรวจหาเชื้อ BmNPV อีกครั้งด้วยวิธีพีซีอาร์เพื่อให้แน่ใจว่าหนอนไหมมีเชื้อ BmNPV เข้าทำลาย เมื่อผีเสื้อไหมวางไข่ นำไข่ไหมที่ได้จากแม่ผีเสื้อที่มีเชื้อ BmNPV ไปทำความสะอาดฆ่าเชื้อ (disinfection) แล้วเลี้ยงไหมด้วยเทคนิคปลอดเชื้อไปตลอดวงชีวิตของไหม อีกกลุ่มการทดลองหลังจากไข่ไหมที่ได้รับการฆ่าเชื้อที่ปนเปื้อนมาจากภายนอก แล้วนำไปเลี้ยงด้วยใบหม่อน ในสภาพห้องเลี้ยงแบบดั้งเดิม และทำการตรวจหาเชื้อ BmNPV เป็นระยะ เพื่อเป็นการติดตามหาที่มาของการเชื้อ ซึ่งสามารถศึกาาการถ่ายทอดโรคแกรสเซอรี่ของหนอนไหมได้ ถ้าเป็นการถ่ายทอดโรคจากพ่อแม่ไปสู่รุ่นลูก (vertical transmission) เพราะหากตรวจพบเชื้อ BmNPV จากหนอนไหมในขั้นตอนนี้ การติดเชื้อควรจะมาจากภายในตัวไหมเท่านั้น 3 นำเทคนิคพีซีอาร์มาตรวจเชื้อสาเหตุของ BmNPV ได้อย่างมีประสิทธิภาพ งานวิจัยตีพิมพ์โดย มัลลิกา แก้ววิเศษ และคณะ 2547 ; 2006 เป็นการพัฒนาและดัดแปลงวิธีการสกัดดีเอ็นเอจากเชื้อ BmNPV โดยวิธีการต่างๆ แล้วนำไปตรวจหาเชื้อ ด้วยวิธีพีซีอาร์ โดยการออกแบบไพร์เมอร์จากยีนที่ควบคุมการสร้างผลึก โปรทีนของไวรัส (polh gene) และดีเอ็นเอสกัดได้จากเลือดหนอนไหม คณะผู้วิจัยสามารถตรวจพบเชื้อ BmNPV ในหนอนไหม หลังจากได้รับเชื้อไปแล้ว 3 วัน ซึ่งเป็นระยะการสร้างผลึกโปรทีนห่อหุ้มอนุภาคไวรัส ส่วนโครงการวิจัยนี้ผู้วิจัยจะทดลองออกแบบไพร์เมอร์จากยีนที่เกี่ยวข้องกับ Viral DNA replication หรือยีนอื่นที่สามารถตรวจเชื้อ BmNPV ได้ในระยะเริ่มต้นของการเข้าทำลาย (early infection) ในหนอนไหม นอกจากนี้งานวิจัยที่เกี่ยวข้องเป็นการจำแนก polyhedrin gene และคณะนักวิจัยพบยีน polyhedrin (full length sequence) ในไหมไทย และเปรียบเทียบpolyhedrin gene กับหนอนไหมสายพันธุ์ต่างๆจากต่างประเทศ ซึ่งผลงานวิจัยที่เกี่ยวข้องดังกล่าวมีความน่าสนและ)ข้อมูลนี้เป็นประโยชน์ต่อผู้วิจัยเป็นอย่างยิ่ง ผู้วิจัย ขอขอบพระคุณคณะกรรมการผู้พิจารณาทุนฯ เป็นอย่างสูงที่กรุณาให้คำแนะนำข้อมูลเพิ่มเติม ซึ่งผู้วิจัยสามารถสืบค้นข้อมูล และติดต่อขอคำแนะนำคณะนักวิจัยดังกล่าว ศึกษาและอ้างอิงข้อข้อมูลวิจัย เพื่อหลีกเลี่ยงการทำงานที่ซ้ำซ้อน นำมาซึ่งผลงานวิจัยเป็นไปได้อย่างต่อเนื่อง และสามารถต่อยอดโครงการวิจัยต่อไป สถิติการเปิดชม : 1,510 ครั้ง ดาวน์โหลด : 77 ครั้้ง   แจ้งปัญหาการดาวน์โหลดที่นี่ (* หากไม่สามารถดาวน์โหลดได้) รายงานวิจัย ฉบับสมบูรณ์: รายงานวิจัยฉบับสมบูรณ์ (Full Paper) บทคัดย่อ (Abstract) : แสดงบทคัดย่อ เลือกดาวน์โหลดแบบลิงค์ :